Waters ACQUITY UPLC色譜柱怎么安裝和平衡？

  Waters ACQUITY UPLC色譜柱專用于ACQUITY UPLC系統(tǒng)，它采用超純?cè)噭┰跐M足cGMP要求并獲得ISO9001認(rèn)證的工廠進(jìn)行生產(chǎn)。每批ACQUITY BEH填料均采用酸性、堿性和中性分析物進(jìn)行了色譜分析測(cè)試，并且填料的指標(biāo)控制嚴(yán)苛，以保證色譜柱的重現(xiàn)性。每根色譜柱都經(jīng)過(guò)單獨(dú)測(cè)試，色譜柱的性能圖譜和填料的批次檢驗(yàn)證書(shū)一起存儲(chǔ)在eCord™智能芯片上。

  ACQUITY Premier BEH色譜柱提供帶或不帶VanGuard™*集成技術(shù)(FIT)保護(hù)柱兩種規(guī)格。VanGuard FIT保護(hù)柱專為延長(zhǎng)分析柱使用壽命而設(shè)計(jì)，可減少樣品基質(zhì)的污染或顆粒物進(jìn)入色譜柱，而不會(huì)影響分離性能。保護(hù)柱可輕松更換，以便恢復(fù)分離性能，延長(zhǎng)分析柱的使用壽命。

  此外，ACQUITY Premier BEH色譜柱采用創(chuàng)新的MaxPeak™高性能表面技術(shù)，能夠盡量減少分析物/表面相互作用，避免可能因此造成的樣品損失，從而提高分析物回收率、分析靈敏度和重現(xiàn)性。

  每根ACQUITY BEH色譜柱的色譜柱包裝盒或eCord智能芯片中都隨附COA報(bào)告和性能測(cè)試報(bào)告。COA報(bào)告是針對(duì)填料的批次測(cè)試報(bào)告，包括填料批號(hào)、填料顆粒鍵和前和鍵合后的分析數(shù)據(jù)、測(cè)試結(jié)果和所用的測(cè)試條件。性能測(cè)試色譜圖提供每根色譜柱的以下信息：批號(hào)、色譜柱序列號(hào)、USP塔板數(shù)、USP拖尾因子、保留因子以及色譜條件。

a. eCord安裝（可能并非所有色譜柱配置都適用）

eCord智能芯片按鈕專用于ACQUITY UPLC和ACQUITY Arc™系統(tǒng)，需要裝在儀器柱溫箱模塊的側(cè)面。eCord按鈕經(jīng)過(guò)磁化處理，不需要專門(mén)的安裝操作。有關(guān)eCord智能芯片功能的更多信息，請(qǐng)參閱相關(guān)維護(hù)和使用手冊(cè)。

b. 色譜柱安裝（帶或不帶VanGuard FIT保護(hù)柱）

注：在處理ACQUITY BEH色譜柱和任何化學(xué)品之前，請(qǐng)咨詢您的安全主管部門(mén)和/或參照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)，使用適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)裝備。ACQUITY BEH色譜柱出廠時(shí)保存于100%乙腈中。下述步驟給出的流速適用于內(nèi)徑2.1 mm的色譜柱。

1. 灌注泵系統(tǒng)，排出含緩沖鹽的流動(dòng)相，然后將色譜柱的入口端連接至進(jìn)樣器出口。

2. 通過(guò)將泵流速設(shè)置為0.1 mL/min，并且在至少5 min增加至0.5 mL/min，用100%有機(jī)流動(dòng)相（甲醇或乙腈）沖洗色譜柱。

3. 當(dāng)流動(dòng)相可從色譜柱出口均勻流出時(shí)，停流速，并將色譜柱出口連接至檢測(cè)器。這能防止氣泡進(jìn)入檢測(cè)系統(tǒng)。

4. 按照步驟2所述逐漸增加流速。

5. 一旦柱壓和基線達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，即可繼續(xù)進(jìn)行下一部分操作。

c. 色譜柱平衡

在更換為其他流動(dòng)相體系之前，務(wù)必確保流動(dòng)相的兼容性。請(qǐng)用至少10倍柱體積的流動(dòng)相平衡色譜柱（色譜柱體積請(qǐng)參見(jiàn)表1）。當(dāng)色譜柱達(dá)到恒定背壓時(shí)，可認(rèn)為該柱已達(dá)到熱力學(xué)平衡。

表1.不同規(guī)格色譜柱柱體積(mL)（乘以 10得到?jīng)_洗色 譜柱所用的流動(dòng)相體積）

  為了避免流動(dòng)相緩沖鹽在色譜柱或系統(tǒng)中發(fā)生析出，請(qǐng)使用5倍柱體積的水/有機(jī)溶劑混合溶液沖洗色譜柱，其中有機(jī)溶劑比例應(yīng)與所需緩沖鹽流動(dòng)相中的有機(jī)溶劑比例相同或更低。（例如，引入60%甲醇/40%緩沖鹽流動(dòng)相之前，應(yīng)使用60%甲醇水溶液沖洗色譜柱和系統(tǒng)。）

  對(duì)于采用BEH HILIC填料的色譜柱，用50倍柱體積的50:50乙腈:水溶液（含最終濃度為10mM的緩沖鹽）進(jìn)行沖洗。對(duì)于采用BEH Amide填料的色譜柱，用50倍柱體積的60:40乙腈:水溶液進(jìn)行沖洗。進(jìn)第一針樣品前，用20倍柱體積的流動(dòng)相（初始條件）平衡色譜柱（色譜柱體積請(qǐng)參見(jiàn)表1）。請(qǐng)參閱“BEH HILIC色譜柱入門(mén)”或“Amide色譜柱入門(mén)”獲取詳細(xì)信息。

d. 初始柱效測(cè)定

1. 使用色譜柱之前，需要先進(jìn)行柱效測(cè)試。這項(xiàng)測(cè)試可包括 ：

a. 您所在實(shí)驗(yàn)室常用的混合標(biāo)準(zhǔn)品，和/或

b. Waters柱性能測(cè)試報(bào)告中測(cè)試柱效所用的標(biāo)準(zhǔn)品。

注：如果采用(b)項(xiàng)的分析物進(jìn)行柱效測(cè)試，在等度條件下測(cè)得的柱效可能低于沃特世色譜柱性能報(bào)告中所示的柱效。這種情況是正常的。為了盡可能減小系統(tǒng)體積，沃特世的等度色譜柱測(cè)試系統(tǒng)進(jìn)行了相應(yīng)的改進(jìn)。這對(duì)于色譜柱填充質(zhì)量的考察相當(dāng)具有挑戰(zhàn)性，可確保色譜柱被最好地裝填。

  這些經(jīng)過(guò)改造的特殊測(cè)試系統(tǒng)不再具有商業(yè)可行性，方法的靈活性亦受限，只能用于等度色譜柱測(cè)試。

2. 測(cè)定理論塔板數(shù)(N)，并定期對(duì)比該數(shù)值。

3. 按預(yù)定的時(shí)間間隔進(jìn)行重復(fù)測(cè)試，跟蹤色譜柱性能隨時(shí)間的變化情況。所得柱效結(jié)果可能會(huì)有微小差異，這可能是由于連接質(zhì)量、運(yùn)行環(huán)境、系統(tǒng)電子設(shè)備、試劑質(zhì)量、色譜柱條件和操作員技術(shù)等方面存在差異所致。

e. 色譜柱QR碼

色譜柱標(biāo)簽上的快速參考卡(QR)碼可提供色譜柱專有信息（即色譜柱的唯yi標(biāo)識(shí)符 - P/N和序列號(hào)），這些信息按照廣泛采用的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行編碼。

1. 可使用任何能掃描QR碼的設(shè)備進(jìn)行掃描（即使用智能手機(jī)和平板電腦的內(nèi)置攝像頭應(yīng)用程序進(jìn)行掃描）。

2. QR碼直接鏈接至waters.com的色譜柱信息中心。

3. 獲取關(guān)于色譜柱的技術(shù)信息和專業(yè)信息（即COA報(bào)告和應(yīng)用紀(jì)要）。

f. VanGuard保護(hù)柱

  VanGuard保護(hù)柱專門(mén)用于ACQUITY UPLC色譜柱和ACQUITYUPLC系統(tǒng)。這些2.1 mm（內(nèi)徑）× 5 mm（長(zhǎng)）的保護(hù)柱設(shè)備所使用的UPLC填料和篩板與沃特世內(nèi)徑2.1 mm的UPLC色譜柱相同。VanGuard保護(hù)柱可直接連接至ACQUITY UPLC色譜柱的入口端。

注：為了確保VanGuard保護(hù)柱的連接無(wú)空隙且無(wú)滲漏，在出廠時(shí)未將保護(hù)柱的箍環(huán)和錐箍進(jìn)行永jiu性固定。取下將這兩個(gè)部件固定至保護(hù)柱管路的O形圈時(shí)，必須謹(jǐn)慎操作。

安裝說(shuō)明

1. 將VanGuard保護(hù)柱從包裝盒中取出，移去塑料塞頭。

2. 調(diào)整保護(hù)柱方向使其外接頭朝上，小心取下在運(yùn)輸期間用于固定箍環(huán)和錐箍的橡膠O形圈（箍環(huán)和錐箍尚未永jiu性固定）。

3. 使ACQUITY UPLC色譜柱垂直于工作臺(tái)表面，且色譜柱入口朝下（色譜柱出口朝上）。

4. 將VanGuard保護(hù)柱從下方插入ACQUITY UPLC色譜柱入口，并用手?jǐn)Q緊（箍環(huán)和錐箍尚未永jiu性固定）。

5. 將VanGuard保護(hù)柱推入色譜柱入口后，將組裝好的色譜柱和保護(hù)柱翻轉(zhuǎn)180°，使保護(hù)柱位于上方。

6. 如上圖所示，將兩個(gè)5/16英寸扳手分別置于ACQUITY UPLC色譜柱的平坦部分和VanGuard保護(hù)柱六角螺母（外接頭）處，然后擰緊。

7. 擰緊1/4圈，固定箍環(huán)和錐箍。

8. 松開(kāi)接頭并檢查錐箍深度，確保錐箍*固定。經(jīng)適當(dāng)固定后，錐箍深度將與ACQUITY UPLC系統(tǒng)中其他連接相似。

9. 重新連接保護(hù)柱，使流動(dòng)相流經(jīng)保護(hù)柱，檢查滲漏情況。

g. VanGuard FIT保護(hù)柱

  VanGuard FIT保護(hù)柱專門(mén)用于ACQUITY Premier色譜柱。對(duì)于帶VanGuard FIT保護(hù)柱的ACQUITY Premier色譜柱，可以使用兩個(gè)3/8英寸扳手更換VanGuard FIT保護(hù)柱。只需用扳手咬合住保護(hù)柱和色譜柱末端螺母的平坦部分，然后逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)（見(jiàn)圖1），即可拆下VanGuard FIT保護(hù)柱，然后按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)范合理?xiàng)壷谩?/span>

  接下來(lái)可以使用新的VanGuard FIT保護(hù)柱更換棄置的保護(hù)柱。沿順時(shí)針?lè)较蛴檬謹(jǐn)Q緊新的保護(hù)柱，再用兩個(gè)3/8英寸扳手?jǐn)Q緊。正確密封的位置不應(yīng)超過(guò)手?jǐn)Q緊處的1/4圈。