生物分子純化指南
■抗體純化
★單抗藥物采用 UNOsphere SUPrA 親和介質(zhì)進(jìn)行捕獲，UNOsphere 離子交換中間純化，最后用CHT 陶瓷羥基磷灰石進(jìn)行精純，該生產(chǎn)工藝可直接得到高純度的抗體，并能zui有效的去除宿主蛋白、聚合體、DNA 和內(nèi)毒素。
★Affi-Gel 和Affi-Prep Protein A 介質(zhì)上偶聯(lián)的Protein A 可與免疫球蛋白的Fc 鏈結(jié)合，能有效純化各種來(lái)源的抗體，包括血清，腹水和培養(yǎng)液等。并且與哺乳動(dòng)物IgG 具有更高的親和性。
★DEAE/CM Affi-Gel 藍(lán)膠：雙配基功能親和凝膠，其中共價(jià)結(jié)合的Cibacron blue F3GA 染料配基可以結(jié)合白蛋白、蛋白酶和其他補(bǔ)體蛋白；DEAE 或CM 在不同條件下能有效結(jié)合IgG。因此同樣可以一步純化血清和腹水中的IgG，并且洗脫液中無(wú)蛋白酶活性，是Protein A 的經(jīng)濟(jì)替代品。
★Macro-Prep High Q 和High S 兩步離子交換策略非常便于IgM 的純化，純度可達(dá)95%以上。
■抗原純化
★Affi-Gel Hz 活化載體通過(guò)結(jié)合抗體分子Fc 鏈的碳水化合物部分，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)IgG 分子的定向耦聯(lián)，這種結(jié)合產(chǎn)生更特異的抗原-抗體作用，比其他介質(zhì)高出100-300%的抗原結(jié)合量。
■重組蛋白純化
★Profinity IMAC 介質(zhì)是一種用于分離帶有 His-Tag 標(biāo)簽的重組蛋白的金屬螯合介質(zhì)。Profinity IMAC 以最新的UNOsphere 為基質(zhì)，IDA 配基螯合金屬Ni，具有高流速，高載量，高分辨率的特點(diǎn)，可一步純化His 標(biāo)簽的重組蛋白。
★Profinity GST 預(yù)裝柱是在UNOsphere 基質(zhì)偶聯(lián)了谷胱甘肽衍生物，可以與谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶結(jié)合，用于純化帶有GST標(biāo)簽的重組蛋白。同樣具有高流速，高載量，高分辨率的特點(diǎn)。
★Profinity eXact 融合標(biāo)簽系統(tǒng)是基于親和標(biāo)簽純化蛋白質(zhì)的系統(tǒng)，用以解決在其他親和標(biāo)簽系統(tǒng)中普遍存在的標(biāo)簽去除的瓶頸。耦聯(lián)在瓊脂糖基質(zhì)中的枯草桿菌蛋白酶可以特異性地識(shí)別枯草桿菌蛋白酶原的N 端前結(jié)構(gòu)域75 個(gè)氨基酸的標(biāo)簽序列。利用含氟的洗脫緩沖液引發(fā)了枯草桿菌蛋白酶的酶切活性，可以快速而精確的從融合蛋白質(zhì)中切下融合的標(biāo)簽，同時(shí)釋放出純化的目標(biāo)蛋白。
★不帶標(biāo)簽的普通重組蛋白可采用UNOsphere 離子交換介質(zhì)捕獲，陶瓷羥基磷灰石，氟代磷灰石CFT，Macro-Prep 離子交換或疏水作為中間純化或精純的策略，其中UNOsphere Q/S 具有高流速高載量低反壓的特點(diǎn)，能有效的進(jìn)行樣品的粗分離；陶瓷羥基磷灰石對(duì)樣品中的鹽不敏感，樣品無(wú)需脫鹽即可直接上樣，可單獨(dú)用磷酸鹽濃度單梯度洗脫，也可以先用氯化鈉濃度梯度洗脫，再用磷酸鹽梯度洗脫的雙梯度洗脫模式，從而達(dá)到更高的分辨率。
■包涵體蛋白純化
★包涵體溶于8M 尿素或6M 鹽酸胍中，可直接上樣于高化學(xué)穩(wěn)定性的UNOsphere、Macro-Prep 離子交換介質(zhì)進(jìn)行純化，也可以用陶瓷羥基磷灰石I 型純化。對(duì)于含His 標(biāo)記的重組包涵體，可用Profinity IMAC 金屬螯合快速捕獲并一步純化，或者進(jìn)行柱上復(fù)性同步純化。
■酶的純化
★UNOsphere 離子交換，Macro-Prep 離子交換和疏水，羥基磷灰石都能有效分離純化各種酶，其中羥基磷灰石和Macro-Prep DEAE/CM 對(duì)酶的吸附更加溫和，不影響酶的活性。
★Bio-Rex 70 弱陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可提供更高的載量，更溫和的吸附作用，并支持在位再生和清洗。
■硫酸銨沉淀樣品的純化
★沉淀樣品直接上Macro-Prep 甲基或丁基疏水，洗脫組分再上陶瓷羥基磷灰石進(jìn)行雙梯度洗脫精純，或上離子交換進(jìn)行精純。
★先以Bio-Gel P-6DG 脫鹽，再上離子交換單梯度洗脫或陶瓷羥基磷灰石雙梯度洗脫。
■寡糖、多糖和多糖肽的純化
★Bio-Gel P-2, P-4, P-6 和P-10 等可以高分辨率純化寡糖和多糖，以聚丙烯酰胺為基質(zhì)，不會(huì)與糖形成多氫鍵非特異性吸附，可獲得最高得率。
★Macro-Prep DEAE/CM/High Q 和High S 離子交換以聚苯乙烯二乙烯為基質(zhì)，可用于純化多糖和多糖肽，分辨率高，無(wú)非特異性吸附。
■去除內(nèi)毒素
★Macro-Prep 離子交換和陶瓷羥基磷灰石都能有效去除內(nèi)毒素，是一種高效、經(jīng)濟(jì)的選擇。
★Affi-Prep 多粘菌素親和介質(zhì)可結(jié)合來(lái)自許多革蘭氏陰性菌的內(nèi)毒素，具備很高的去除率，線性流速可達(dá)2000cm/hr，70bar的耐受壓力，可在分析級(jí)和工業(yè)級(jí)等規(guī)模上應(yīng)用。
■耦聯(lián)活化親和純化
★Profinity 環(huán)氧化物介質(zhì)可固化含有氨基、硫醇、羥基等基團(tuán)的親核配基，耦聯(lián)后可有效純化蛋白質(zhì)，糖類和DNA 等，例如耦聯(lián)Protein A 以純化單抗，耦聯(lián)麥芽糖結(jié)合蛋白和鈣調(diào)蛋白配基可有效純化重組蛋白。該介質(zhì)以UNOsphere為基質(zhì)具有*的物理強(qiáng)度??高流速、低反壓的大孔結(jié)構(gòu)，可以在很高的流速下操作，使得生產(chǎn)效率得以提高。
★Affi-Gel 10 可有效耦聯(lián)pI 6.5-11 的中性或堿性蛋白，Affi-Gel 15 用于耦聯(lián)pI<6.5 的酸性蛋白，蛋白偶聯(lián)量為35mg/ml 凝膠。
★Affi-Gel Hz 活化載體通過(guò)結(jié)合抗體分子的Fc 段的碳水化合物部分實(shí)現(xiàn)對(duì)IgG 分子的的定向耦聯(lián)抗體，，這種結(jié)合產(chǎn)生更特異的抗原和抗體作用，比其他介質(zhì)高出100-300%的抗原結(jié)合量。
★Affi-Gel 102 碳二亞胺活化親和介質(zhì)能耦聯(lián)含初端或末端羧基的配體，可以提供經(jīng)濟(jì)靈活的化學(xué)選擇。
■核酸和病毒純化
★CHT 陶瓷羥基磷灰石II 型對(duì)超螺旋DNA 和線性DNA，雙鏈DNA 和單鏈DNA 具有ji高的分辨率，也能有效分離純化病毒。
★基因治療用病毒載體（如腺病毒等）用UNOsphere S 和Q 兩步純化可獲得最佳的純度和得率，而且容易規(guī)模放大。
★Chelex 100 分子生物學(xué)級(jí)樹(shù)脂用于緩沖液和離子試劑的超純化，可有效去除DNA 樣品中影響測(cè)序和PCR 反應(yīng)的各種金屬污染物，也可去除各種生物樣品的金屬污染物。
★AG 50W-X8 陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可有效去除DNA 樣品中的溴化乙錠和碘化丙錠的污染。
■去除蛋白質(zhì)樣品中核酸
★CHT 陶瓷羥基磷灰石II 型在中性pH 下對(duì)核酸有效吸附，而對(duì)蛋白質(zhì)吸附較弱，用一定的磷酸鹽濃度梯度可有效去除蛋白樣品中絕大部分核酸。
★UNOsphere S 和Macro-Prep High S 和CM 都能有效結(jié)合帶正電的目標(biāo)蛋白，而讓核酸流穿過(guò)從而去除大部分核酸。
★UNOspherer Q 和Macro-Prep High Q 和DEAE 對(duì)核酸具有很高的結(jié)合能力，在緩沖液的pH 值低于目標(biāo)蛋白等電點(diǎn)的情況下使目的蛋白流穿，可以高效的去處蛋白質(zhì)樣品中的核酸。
■樣品的脫鹽
★蛋白質(zhì)，核酸等生物大分子的脫鹽可采用Bio-Gel P-6DG。
★AG501-X8 可用于水或其他非離子物質(zhì)的去離子和脫，AG11 A8 混合床樹(shù)脂可從蛋白樣品中去除SDS 和游離的熒光染料，并可從氨基酸中去除無(wú)機(jī)鹽。
■小量和微量蛋白質(zhì)精純
★UNO Q/S Monolith，采用連續(xù)床技術(shù)，高流速，超高分辨率，10 分鐘內(nèi)分離4 個(gè)蛋白質(zhì)
■中草藥與天然產(chǎn)物活性成分的純化
親水性活性成分
★UNOsphere 或Macro-Prep 陰陽(yáng)離子交換能有效分離其中的生物酸、生物堿、皂甙等組分。
★Affi-Gel 硼膠對(duì)含鄰、順、式羥基的化合物具有高親和力和高載量，可高效分離糖，糖肽，核苷酸，核苷，兒茶酚胺等小分子化合物。
★具有小分子量排阻范圍的凝膠過(guò)濾層析Bio-Gel P-2、P-4、P-6 和P-10 等能以分子排阻模式有效分離各種水溶性小分子物質(zhì)，分辨率ji高。
★AG1、AG2 和AG50 等分析級(jí)樹(shù)脂可以分離各種小分子有機(jī)物，如各種有機(jī)酸、磷酸肌醇、氨基酸、小肽、核苷酸等。
親脂性活性成分
★Bio-Beads S-X 介質(zhì)是中性，多孔的聚苯乙烯二乙烯基苯微球體，用于親脂性多聚物和有機(jī)洗脫溶質(zhì)的分子量排阻層析，含分子量0-400，0-1000，0-2000 和600-14,000等各種不同排阻范圍，具有ji高的分辨率，兼容幾乎所有的有機(jī)溶劑，包括各種芳香族、鹵代烷等溶劑。可用于分離天然產(chǎn)物中親脂性的物質(zhì)，環(huán)境中的各種污染物如殺蟲劑、滅鼠劑、多環(huán)芳香化合物和不飽和酯類等。
■單糖、寡糖、糖醇和有機(jī)酸的分析
★Aminex HPLC 分析柱，由聚苯乙烯二乙烯苯樹(shù)脂填裝而成的 Aminex HPLC 柱，具有良好的高壓及 pH 穩(wěn)定性、高柱效和選擇性。通過(guò)離子調(diào)節(jié)分配層析技術(shù)分離混合物，根據(jù)多種不同的化學(xué)特性分離分子，其分離機(jī)制包括離子排阻、離子交換、正相和反相分配、分子量排阻和配體交換等多重機(jī)制分離。根據(jù)層析的物理和化學(xué)性質(zhì)，可選擇使用一個(gè)或者多個(gè)分離機(jī)制。Aminex 是工業(yè)界和分析實(shí)驗(yàn)室zui普遍使用的用于分析碳水化合物、有機(jī)酸、醇、糖醇、有機(jī)堿和其它包括肽和核苷酸的有機(jī)小分子的分析高效液相色譜柱。
