一、引言：從冬奧會(huì)“無(wú)胡椒菜單"說(shuō)起

2022年北京冬奧會(huì)期間，一則新聞引發(fā)廣泛關(guān)注：運(yùn)動(dòng)員的678道菜譜中，全部去掉了胡椒。為什么？因?yàn)楹分泻幸环N名為去甲烏藥堿（Higenamine） 的物質(zhì)，它屬于世界反興奮劑機(jī)構(gòu)（WADA）明令禁止的β2-激動(dòng)劑類禁用物質(zhì)。

去甲烏藥堿屬于芐基異喹啉類生物堿，廣泛分布于花椒、蓮子、釋迦果、南天竹、番荔枝等多種植物中。不僅如此，以這些植物為原料的胡椒粉、五香粉等調(diào)味料，以及部分減肥產(chǎn)品、能量飲料中也可能含有該成分。它能擴(kuò)張氣道、加快心率，對(duì)心臟有一定毒性。對(duì)普通人而言或許無(wú)礙，但對(duì)運(yùn)動(dòng)員來(lái)說(shuō)，誤食含有去甲烏藥堿的食品，就意味著“藥檢陽(yáng)性"的風(fēng)險(xiǎn)。

正因如此，去甲烏藥堿的檢測(cè)不僅是食品安全問(wèn)題，更事關(guān)運(yùn)動(dòng)員的職業(yè)生涯和國(guó)家榮譽(yù)。為應(yīng)對(duì)這一挑戰(zhàn)，海關(guān)總署于2019年10月25日發(fā)布了SN/T 5171-2019《出口植物源性食品中去甲烏藥堿的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》。該標(biāo)準(zhǔn)由武漢海關(guān)、湖北省體育科學(xué)研究院、湖北省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究院等單位共同起草，主要起草人王晗等專家領(lǐng)銜完成，于2020年5月1日正式實(shí)施。它的出臺(tái)，為出口食品中去甲烏藥堿的檢測(cè)提供了統(tǒng)一、規(guī)范的技術(shù)標(biāo)尺。

二、標(biāo)準(zhǔn)基本信息

該標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1—2009給出的規(guī)則起草，由中華人民共和國(guó)海關(guān)總署提出并歸口。

三、適用范圍：六類代表性基質(zhì)，其他食品可參照

SN/T 5171-2019明確適用于出口植物源性食品中去甲烏藥堿殘留量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)具體適用于以下六類代表性食品基質(zhì)：

·         蔬菜類：白菜（大白菜）

·         水果類：火龍果、橙子

·         油料類：花生

·         調(diào)味料/蔬菜類：辣椒

·         中藥材/植物類：川芎

值得注意的是，標(biāo)準(zhǔn)明確指出“其他食品也可參照使用" 。這一開(kāi)放性的表述，使得該標(biāo)準(zhǔn)在實(shí)際應(yīng)用中具有更廣泛的指導(dǎo)意義——無(wú)論是香辛料、代用茶，還是其他植物源性食品，均可參照本標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行檢測(cè)。

四、方法原理：酸化提取—分散固相萃取凈化—LC-MS/MS測(cè)定—內(nèi)標(biāo)法定量

標(biāo)準(zhǔn)的分析方法可概括為以下技術(shù)路線：

試樣加入0.5%甲酸乙醇溶液提取，提取液經(jīng)分散固相萃取法凈化，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。

這一方法流程包含四個(gè)核心環(huán)節(jié)：

1. 酸化乙醇提取

標(biāo)準(zhǔn)采用0.5%甲酸乙醇溶液作為提取溶劑。去甲烏藥堿屬于生物堿類化合物，具有弱堿性。在酸性條件下，生物堿形成鹽類，更易被極性溶劑提取。與常規(guī)的甲醇或乙腈體系相比，0.5%甲酸乙醇溶液能夠更有效地從植物基質(zhì)中提取去甲烏藥堿。

2. 分散固相萃取凈化

提取液經(jīng)分散固相萃?。?/strong>d-SPE） 凈化。這一QuEChERS核心技術(shù)的引入，能夠有效去除樣品中的色素、脂類、糖類等干擾物質(zhì)，降低基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。凈化后的提取液可直接進(jìn)樣分析，操作簡(jiǎn)便、高效。

3. LC-MS/MS檢測(cè)

采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀（LC-MS/MS） 進(jìn)行檢測(cè)。質(zhì)譜檢測(cè)采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式，具有極高的選擇性和靈敏度，能夠有效降低復(fù)雜食品基質(zhì)的背景干擾。

4. 內(nèi)標(biāo)法定量

標(biāo)準(zhǔn)采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析。相較于外標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)法通過(guò)加入已知濃度的內(nèi)標(biāo)物，可有效校正前處理過(guò)程和儀器分析中的誤差，提高定量結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度。

五、關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)

1. 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

稱取適量去甲烏藥堿標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（精確至0.0001g），用甲醇溶解，配制成濃度為1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18℃以下避光保存。

2. 檢測(cè)限（LOD）

標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法檢測(cè)限為10.0 μg/kg。相比之下，常規(guī)高效液相色譜法的檢測(cè)限約為50 μg/kg。LC-MS/MS方法的靈敏度提升了約5倍，能夠滿足更嚴(yán)格的殘留限量檢測(cè)要求。

3. 提取溶劑的選擇

標(biāo)準(zhǔn)采用0.5%甲酸乙醇溶液作為提取溶劑。這一選擇與常見(jiàn)的甲醇/乙腈體系相比，對(duì)去甲烏藥堿這類生物堿類化合物具有更好的提取效率。

4. 定量方式

采用內(nèi)標(biāo)法，通過(guò)加入內(nèi)標(biāo)物校正基質(zhì)效應(yīng)和操作誤差，確保定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

六、方法性能：可靠的分析能力

根據(jù)相關(guān)研究數(shù)據(jù)，采用類似方法（超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法）檢測(cè)去甲烏藥堿時(shí)：

·         線性范圍：0.1~50.0 μg/L

·         相關(guān)系數(shù)（r） ：大于0.999

·         檢出限（LOD） ：0.5 μg/kg

·         定量限（LOQ） ：1.5 μg/kg

在SN/T 5171-2019規(guī)定的白茶等基質(zhì)中，去甲烏藥堿的加標(biāo)回收率在87.9%~103% 之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為5.9% 。這些數(shù)據(jù)表明，該方法準(zhǔn)確度高、精密度好，能夠滿足不同植物源性食品基質(zhì)中去甲烏藥堿殘留檢測(cè)的要求。

七、標(biāo)準(zhǔn)的意義與應(yīng)用價(jià)值

1. 填補(bǔ)了食源性興奮劑檢測(cè)的方法空白

去甲烏藥堿被WADA列為禁用物質(zhì)后，如何準(zhǔn)確檢測(cè)食品中的去甲烏藥堿成為監(jiān)管難點(diǎn)。SN/T 5171-2019的出臺(tái)，填補(bǔ)了我國(guó)出口植物源性食品中去甲烏藥堿檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)空白，為海關(guān)監(jiān)管和出口企業(yè)自檢提供了統(tǒng)一的技術(shù)依據(jù)。

2. 助力運(yùn)動(dòng)員“舌尖上的安全"

從北京冬奧會(huì)“無(wú)胡椒菜單"到各類大型體育賽事的食源性興奮劑防控，去甲烏藥堿一直是運(yùn)動(dòng)員食品安全保障的重點(diǎn)關(guān)注對(duì)象。該標(biāo)準(zhǔn)為賽事食品安全保障提供了科學(xué)、可靠的檢測(cè)手段。

3. 應(yīng)對(duì)國(guó)際貿(mào)易技術(shù)壁壘

隨著全球?qū)κ吃葱耘d奮劑關(guān)注度的不斷提高，各國(guó)對(duì)進(jìn)口食品中去甲烏藥堿的檢測(cè)要求日益嚴(yán)格。該標(biāo)準(zhǔn)為我國(guó)出口植物源性食品提供了與國(guó)際接軌的檢測(cè)方法，有助于有效應(yīng)對(duì)技術(shù)性貿(mào)易壁壘。

4. 方法科學(xué)先進(jìn)

該方法融合了酸化乙醇提取（針對(duì)生物堿特性優(yōu)化）、分散固相萃取凈化（快速、高效去除干擾）和LC-MS/MS檢測(cè)（高選擇性、高靈敏度）三大技術(shù)優(yōu)勢(shì)，代表了當(dāng)前食源性興奮劑檢測(cè)的先進(jìn)水平。內(nèi)標(biāo)法的采用進(jìn)一步保證了定量精度。

5. 覆蓋范圍可擴(kuò)展

標(biāo)準(zhǔn)雖然主要針對(duì)六類代表性基質(zhì)，但明確允許“其他食品也可參照使用"。這一開(kāi)放性的設(shè)計(jì)，使得該標(biāo)準(zhǔn)在實(shí)際應(yīng)用中具有廣泛的擴(kuò)展空間，可應(yīng)用于香辛料、代用茶、保健食品等多種植物源性產(chǎn)品的檢測(cè)。

八、實(shí)操要點(diǎn)與注意事項(xiàng)

對(duì)于實(shí)際開(kāi)展該標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)工作的實(shí)驗(yàn)室和檢測(cè)人員，以下幾點(diǎn)值得特別關(guān)注：

1. 提取溶劑酸度是關(guān)鍵

標(biāo)準(zhǔn)采用0.5%甲酸乙醇溶液作為提取溶劑。甲酸的濃度直接影響生物堿的提取效率——酸度過(guò)低，提取不充分；酸度過(guò)高，可能引入過(guò)多雜質(zhì)。實(shí)際操作中應(yīng)嚴(yán)格控制甲酸的添加量。

2. 內(nèi)標(biāo)法的正確使用

標(biāo)準(zhǔn)采用內(nèi)標(biāo)法定量。應(yīng)選擇合適的內(nèi)標(biāo)物（通常為同位素內(nèi)標(biāo)或結(jié)構(gòu)類似物），并在前處理早期加入，以全程校正提取和凈化過(guò)程中的損失。

3. 基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)估與應(yīng)對(duì)

不同植物源性食品（如蔬菜vs.香辛料vs.中藥材）的基質(zhì)效應(yīng)差異顯著。雖然內(nèi)標(biāo)法可在一定程度上校正基質(zhì)效應(yīng)，但仍建議在方法驗(yàn)證階段對(duì)不同基質(zhì)分別進(jìn)行評(píng)估。

4. 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的保存

去甲烏藥堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液應(yīng)于-18℃以下避光保存。生物堿類化合物在光照和常溫條件下可能發(fā)生降解，影響標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)確濃度。

5. 關(guān)注天然本底值的干擾

去甲烏藥堿天然存在于花椒、蓮子、釋迦果等多種植物中。在實(shí)際檢測(cè)中，應(yīng)區(qū)分“天然含有"與“外源添加"或“殘留超標(biāo)"的不同情形，避免誤判。

九、結(jié)語(yǔ)

SN/T 5171-2019是一項(xiàng)方法科學(xué)、技術(shù)先進(jìn)、針對(duì)性強(qiáng)的檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。它以0.5%甲酸乙醇提取—分散固相萃取凈化—LC-MS/MS檢測(cè)—內(nèi)標(biāo)法定量為核心技術(shù)路線，實(shí)現(xiàn)了對(duì)出口植物源性食品中去甲烏藥堿的精準(zhǔn)、靈敏測(cè)定。

該標(biāo)準(zhǔn)的最大亮點(diǎn)在于將反興奮劑的前沿需求與食品安全檢測(cè)技術(shù)深度融合——它不僅是食品安全檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)，更是保障運(yùn)動(dòng)員“舌尖上的安全"的重要技術(shù)屏障。從胡椒、花椒到蓮子、釋迦果，當(dāng)這些日常食材可能成為運(yùn)動(dòng)員職業(yè)生涯的“隱形雷區(qū)"時(shí)，SN/T 5171-2019提供了一套科學(xué)、可靠的“排雷"方案。

對(duì)于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室而言，深入理解和正確應(yīng)用SN/T 5171-2019，是提升食源性興奮劑檢測(cè)能力、服務(wù)大型體育賽事食品安全保障的必備技能。相關(guān)機(jī)構(gòu)應(yīng)及時(shí)配備相應(yīng)儀器設(shè)備、掌握標(biāo)準(zhǔn)操作流程，特別關(guān)注提取溶劑酸度控制、內(nèi)標(biāo)法的規(guī)范使用和不同基質(zhì)的基質(zhì)效應(yīng)評(píng)估等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，持續(xù)提升檢測(cè)能力，為食品安全和體育事業(yè)保駕護(hù)航。